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    ¥550.00

    货号:BL698A

    规格:5x1mL

    品牌:Biosharp

    498 人浏览

    Quantity:

    本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂,将热启动Taq DNA聚合酶、dNTPSYBR Green I等试剂预混成即用的2x Mix,可对目标cDNA进行快速并具有高特异性的定量检测。本产品采用化学修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶,在 50 ℃以下无活性,只有 95 ℃条件下加热后才能完全恢复酶的活力,最大限度减少非特异性扩增产物的产生,提高荧光定量PCR反应的精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液,可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

     

    产品组分:

    产品编号

    产品名称

    规格

    1

    2×SYBR Green qPCR Mix

    5 x 1ml

    2

    50×ROX Reference Dye

    1ml

     

    保存条件

    收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,一年有效28℃条件下储存6个月避免反复多次冻融。

     

    使用说明

    一、配制 Real-Time PCR反应体系:

    1、将所有试剂2×SYBR Green qPCR MixROX Reference Dye,模板,引物和RNase-Free ddH2O,在室温下融解并彻底混匀避免产生气泡短暂离心后,置于冰上按照下表配制反应液。

    参考下表配制反应体系:

    组分

    20ul体系

    50ul体系

    终浓度

    SYBR Green qPCR Mix

    10μl

    25 μl

    Primer F (10 μM)*

    0.4~0.8 μl

    1.5 μl

    0.2~0.4 uM*

    Primer R (10 μM)*

    0.4~0.8 μl

    1.5 μl

    0.2~0.4 uM*

    50 x ROX Reference Dye**

    cDNA模板

    --

    RNase-Free ddH2O

    20 μl

    50 μl

     

    一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 uM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时,可以在终浓度0.2~0.4 uM范围内调整引物浓度。

    ** 几种常见仪器的最适ROX Reference Dye浓度见下表:

    仪器型号

    使用浓度

    ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/StepOne/ StepOne Plus

    20ul体系加2ul50ul体系加5ul

    ABI 7500/7500 FastQuantStudio ® 3/5QuantStudio 6/7 FlexViiA 7Stratagene Mx3000P/Mx3005PMx4000

    20ul体系加0.4ul50ul体系加1ul

    RocheBio-RadEppendorf

    无需添加

     

    2、盖上或密封反应管/PCR板,轻轻混匀。短暂离心,确保所有组分都在管/板底。

    二、进行Real-Time PCR反应

    1建议采用两步法PCR反应程序进行反应。

    两步法反应程序:

    步骤

    温度

    持续时间

    循环数

    预变性

    95℃

    5min

    1

    变性

    95℃

    10sec

    40

    退火延伸数据采集

    60℃

    30sec

    40

    熔解曲线分析

    根据仪器推荐程序设置

     

    若模板量较低等因素导致扩增效果不佳,可使用三步法程序进行PCR反应。

    三步法反应程序:

    步骤

    温度

    持续时间

    循环数

    预变性

    95℃

    5min

    1

    变性

    95℃

    10sec

    40

    退火

    50-60℃

    30sec

    40

    延伸数据采集

    72℃

    30sec

    40

    熔解曲线分析

    根据仪器推荐程序设置

     

    2上机检测:将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中,运行程序收集数据并分析结果。

    货号
    BL698A
    规格
    5x1mL
    品牌
    Biosharp
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